CRISPR-Cas9系统切割特定的DNA序列，需要Cas9酶在引导RNA(gRNA)的指引下。其中，Cas9酶依赖于靶位点侧翼的特定序列，以允许其识别靶位点，称为原型间隔区相邻基序或PAM。近日，一种能靶向几乎一半的基因组序列，要求更低的“升级版”Cas9酶出现。

　　RISPR就像一个非常准确和高效的电子邮件系统，只要有邮箱号码，它非常准确和具体的到达想要送达的任何地方，但也限制了你可以发的用户接受数量。

　　对许多Cas9同源物进行测序，Cas9酶(ScCas9)脱颖而出，它来自犬链球菌(S. canis)。ScCas9能够靶向其不能到达的基因位点，是一种高度相似的SpCas9直向同源物。

　　限制性更低

　　研究人员通过比较它们在人细胞中的PAM特异性。检测证明：在含有重叠5'-GGGT-3'PAM的目标位点上，编辑活性上SpCas9和ScCas9相当，SpCas9的切割活性受损;在含有各种非重叠5'-NNGN-3'PAM序列上，活性保持相当。

　　进一步的研究发现，在所有含5'-NNGN-3'PAM序列的目标位点中，ScCas9-ABE单碱基编辑系统也有显著的碱基编辑效率。

　　人体细胞中ScCas9和SpCas9 PAM的特异性

　　ScCas9对共有的5'-NGG-3'和5'-NNGN-3'PAM序列都具有亲和力，可以作为SpCas9基因组编辑的有效替代物。

　　新的CRISPR系统允许其靶向许多先前已经超出系统范围的疾病特异性突变。例如，一个典型的基因长度约为1000个碱基，如果他们的目的是简单地敲除整个基因，研究人员可以找到许多不同的PAM序列。

　　准确性显著提高

　　研究人员对先前报道的3个SpCas9高频脱靶位点进行分析，SpCas9在所有3个检查目标上显示出高的直接靶向。ScCas9显示3种靶标的靶向活性相当，其中2个位点上的脱靶活性可忽略不计，而在另一(FANCF位点2)的脱靶比率降低近1.5倍。

　　结果表明：在两者共有的5'-NGG-3'靶标上，ScCas9的基因编辑准确性显著提高。

　　脱靶效率的比较

　　由于ScCas9和SpCas9氨基酸序列是非常相似的，因此猜想ScCas9能直接受益于现在SpCas9的开发流程。